当酵母在葡萄糖介质中生长时,量化细胞内葡萄糖水平

科学领域:

• 微生物学 微生物学
• 生物化学 生物化学
• 酵母的新陈代谢 酵母的新陈代谢

背景情况:

• 细胞内葡萄糖度对于调节碳代谢和葡萄糖运输在Saccharomyces cerevisiae中至关重要.
• 精确测量细胞内葡萄糖是具有挑战性的,因为在细胞采样期间,葡萄糖从介质中转移.
• 以前使用乳糖作为标记物的方法发现了来自介质和细胞表面的携带.

研究的目的:

• 为了研究在酵母中测量期间葡萄糖携带的起源.
• 开发和验证一种准确确定细胞内葡萄糖度的方法.
• 为了比较野生类型和葡萄糖吸收突变酵母菌株的细胞内葡萄糖水平.

主要方法:

• 利用乳糖作为初始的转移标记物来评估葡萄糖的来源.
• 采用基因酶零菌株来量化细胞表面结合的葡萄糖携带量.
• 开发了一种使用L-葡萄糖作为携带标记的精细方法,在采样前不久添加,结合GC-MS分析13C标记的D-葡萄糖.

主要成果:

• 葡萄糖转移源于水相和细胞表面,细胞表面的贡献很小.
• 虽然L-葡萄糖缓慢进入细胞,但在取样前添加时,可以有效地用作转移标记物.
• 在野生型菌株中,细胞内葡萄糖度确定为0.89mM,在突变病毒中,葡萄糖吸收受损的细胞内葡萄糖度为0.24mM.

结论:

• 该研究阐明了葡萄糖携带的来源,提高了测量准确度.
• 使用L-葡萄糖方法,谨慎地定时,为测量酵母中的细胞内葡萄糖提供了一种可行的方法.
• 精确的细胞内葡萄糖测量显示了酵母菌株之间具有不同的葡萄糖运输动力学的显著差异.