通过基于NT*标签的创新融合结构推进TEV蛋白酶的大规模生产
Pragyan P Parida1, Deepa Saraswathi1, Subbarao M V Mopidevi1
1Tata Institute of Fundamental Research Hyderabad, 36/P Gopanpally Village, Ranga Reddy District, Serilingampally, Hyderabad, 500046, Telangana, India.
Current research in structural biology
|October 12, 2023
概括
研究人员通过与蜘蛛丝蛋白域融合,提高了烟草蚀刻病毒蛋白酶 (TEVp) 的可溶性. 这种增强的溶解性允许用于重组蛋白应用的活性TEVp的高产净化.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质的工程.
背景情况:
- 烟草蚀刻病毒蛋白酶 (TEVp) 是一种氨酸蛋白酶,对于在重组蛋白质生产中分裂融合标签至关重要.
- 野生型TEVp的有限溶解性限制了其在生物技术应用中的广泛使用.
- 提高TEVp溶解性的先前策略涉及MBP等聚变合作伙伴.
研究的目的:
- 开发一种高度溶解和活性型的TEVp,以改善重组蛋白净化.
- 设计一种使用蜘蛛丝蛋白域的新型融合结构,以增强TEVp表达和溶解性.
主要方法:
- TEVp与来自Euprosthenops australis的N终端主域的大囊蜘蛛-1的电荷逆转突变 (NT*) 融合.
- 融合结构包含一个TEVp分裂部位,用于细胞内自我处理.
- 蛋白质表达在E.中进行. coli,然后进行净化和活性测定.
主要成果:
- 在NT*-TEVp融合结构中,可溶性蛋白质表达显著增加.
- 大约90-100毫克的活性TEVp被净化每升E. 大肠杆菌培养.
- 经过长时间储存在-80°C后,纯化的酶表现出稳定性和催化活性.
结论:
- 与NT*域的融合有效地提高了TEVp的溶解性和产量.
- 这种工程TEVp是一种稳定,活跃和高度净化的酶,适合各种蛋白质净化工作流程.
- 该战略在生产活性TEVp的现有方法上提供了显著的进步.
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