快速诱导全基因组RNA Pol II高酸化的协议,通过选择性地破坏INTAC酸酶活性
Yu-Xin Ji1, Shibin Hu1, Fei Xavier Chen1
1Fudan University Shanghai Cancer Center, Shanghai Key Laboratory of Medical Epigenetics, Shanghai Key Laboratory of Radiation Oncology, Institutes of Biomedical Sciences, Fudan University, Shanghai, China.
STAR protocols
|October 13, 2023
概括
这项研究引入了一种新的方法来诱导RNA聚合酶II (Pol II) 过酸化,使用INTS8降解标签 (dTAG) 系统和在DLD-1细胞中截断INTS8.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 现有的方法主要集中在抑制RNA聚合酶II (Pol II) 酸化.
- 诱导RNA Pol II高酸化的方法是有限的.
- 了解Pol II酸化对于基因调节至关重要.
研究的目的:
- 开发一种诱导RNA Pol II高酸化的协议.
- 建立一个控制操作INTS8级别的系统.
- 为了验证RNA Pol II酸化的上调.
主要方法:
- 在DLD-1细胞中构建INTS8降解标签 (dTAG) 细胞系.
- 验证INTS8.8的成功敲定和退化.
- 用于救援实验的N端截断INTS8 (INTS8-ΔN) 的宫外表达.
- 对RNA Pol II酸化水平的评估.
主要成果:
- 成功生成和验证INTS8-dTAG系统.
- 在dTAG系统激活时展示INTS8退化.
- 确认RNA Pol II高酸化诱导的发生.
- INTS8-ΔN救援验证了该系统的特异性.
结论:
- INTS8-dTAG系统提供了一种强大的方法来诱导RNA Pol II高酸化.
- 该协议允许精确控制INTS8级别,以研究其在Pol II监管中的作用.
- 开发的系统为研究基因转录和调节提供了有价值的工具.
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