产生质量控制的SARS-CoV-2变种库存
Maren de Vries1, Grace O Ciabattoni1, Bruno A Rodriguez-Rodriguez1
1Department of Microbiology, NYU Grossman School of Medicine, New York, NY, USA.
Nature protocols
|October 13, 2023
概括
一个新的管道产生高质量的严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2) 隔离物,最大限度地减少可靠研究的突变. 这种方法确保了疫苗开发和病原体研究中的数据有效性和可重复性.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
- 传染性疾病 传染性疾病
背景情况:
- SARS-CoV-2 变种的出现对 COVID-19 研究构成了重大挑战.
- 目前用于隔离SARS-CoV-2变体的现有方法可能会引入文物,损害数据可靠性.
- 高质量,可复制的病毒分离物对于疫苗开发,药物查和理解病毒病原体至关重要.
研究的目的:
- 提出一个严格的管道,用于生成高质量的,克隆性孤立的SARS-CoV-2变种.
- 为了尽量减少在隔离和传播过程中获得新的突变.
- 建立严格的控制来检测任何引入的突变.
主要方法:
- 该协议包括八个阶段:细胞维护,从临床标本中分离病毒,用于定位位的斑块检测,用于克隆分离的斑块净化,全基因组深度测序,扩增到主体和工作库存以及糖糖净化.
- 深度测序用于监测整个过程中的突变.
- 质量控制措施在多个步骤中集成.
主要成果:
- 拟议的管道能够产生SARS-CoV-2变体的克隆分离物,其获得突变最小化.
- 该协议有助于创建可靠的注射剂用于体外和体内实验.
- 从生物储存病毒中可以在大约1个月内产生质量控制的工作库存,如果需要从临床样本中分离出来,则可以在1个月内产生,或者需要2-3周的时间.
结论:
- 这一全面的协议提高了涉及SARS-CoV-2变种的研究的可靠性和可重复性.
- 标准化管道将促进在COVID-19研究中的比较和协作努力.
- 产生的高质量分离物对于推进疫苗开发,治疗策略和对SARS-CoV-2的基本理解至关重要.
