克里斯普尔-Cas12a试验带 (克里斯普尔/CAST) 包装:从受感染的牲畜中实地检测布鲁塞拉菌

科学领域:

• 兽医微生物学 兽医微生物学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 动物传播疾病 动物传播疾病

背景情况:

• 布鲁塞洛症是一种由布鲁塞拉菌引起的动物传播疾病,导致严重的经济损失和公共卫生负担.
• 动物中布鲁塞拉感染的早期和准确的诊断对于疾病控制和预防至关重要.
• 克里斯普尔/Cas12a核酶为快速核酸检测提供了一个有前途的平台.

研究的目的:

• 开发一个CRISPR/Cas12a测试带 (CRISPR/CAST) 包,以便在现场快速检测布鲁塞拉核酸.
• 为了在偏远的牲畜群体中快速查布鲁塞拉感染.
• 将CRISPR/Cas12a与复合酶聚合酶放大 (RPA) 和侧流读取相结合,以进行用户友好的测定.

主要方法:

• 选择保存的布鲁塞拉基因bp26用于目标检测.
• 使用Brucella melitensis的CRISPR/CAST测定方法的开发和验证.
• 使用动物血清样本对量化PCR (qPCR) 和孟加拉试验 (RBT) 的CRISPR/CAST性能进行比较.

主要成果:

• 在异热条件下,CRISPR/CAST试验在30分钟内检测到布鲁塞拉DNA,灵敏度为10拷贝/μl.
• 该试验显示高特异性,没有针对相关细菌物种的交叉反应.
• 在CRISPR/CAST检测中,31只绵羊和8只牛的BrucellaDNA呈阳性,检测率高于RBT,结果与qPCR可比.

结论:

• 该CRISPR/CAST套件提供了一种准确,快速,敏感和特定的方法来检测牲畜中的布鲁塞拉DNA.
• 该试验不需要昂贵的设备或专门的实验室,使其成为现场查的理想选择.
• 克里斯普尔/卡斯特是一种有效的工具,用于早期诊断,预防和控制动物中的牛病流行.