基于ddPCR的通用测定方法,用于确定lentivirus的传染性标位和lenti-modified细胞载体拷贝数

科学领域:

• 生物技术和生物医学工程 生物技术和生物医学工程
• 分子生物学和遗传学分子生物学和遗传学
• 细胞和基因疗法细胞和基因疗法

背景情况:

• 将基于细胞的疗法转化为临床环境需要强大的分析方法,符合良好的制造实践 (GMP) 和监管标准.
• 病毒载体对于基因传递至关重要,在创建转基因治疗细胞方面,需要标准化的特征测试来确定功效和安全性.
• 广泛部署的测定对转化应用至关重要,特别是对于携带多种转基因的lentiviral载体.

研究的目的:

• 开发一种通用方法来确定lentivirus修饰细胞中的传染性标位和载体拷贝数 (VCN).
• 建立一种标准化,广泛适用的检测方法,用于对基于lentiviral载体的细胞疗法进行质量控制.
• 为了验证滴滴数字PCR (ddPCR) 对这些关键分析测量的实用性.

主要方法:

• 开发一种通用滴滴数字PCR (ddPCR) 试验,针对无处不在的晶状病毒特异基因和一个家庭基因.
• 使用线性化等离子体控制来仔细评估试验线性,范围,灵敏度,精度和量化极限.
• 将ddPCR衍生的传染性标位与已建立的基于流细胞计的方法进行比较.

主要成果:

• 开发的ddPCR测定证明了与流动细胞计方法的可比性,用于评估各种生产批次的lentivirus传染性标位.
• ddPCR试验被证明适用于确定转基因CAR-T细胞产品中的载体拷贝数 (VCN).
• 试验验证证了线性,灵敏度,准确性,并定义了量化极限.

结论:

• 普遍的ddPCR试验提供了一种标准化和强大的方法来表征透视病毒载体.
• 这些测定支持对基于lentiviral 载体的细胞疗法实施一致的质量控制措施.
• ddPCR方法通过提供可靠的标位和VCN确定方法,促进了更广泛的翻译应用.