相关实验视频
Updated: Jul 13, 2025
11:38
A Quantitative Glycomics and Proteomics Combined Purification Strategy
Published on: March 8, 2016
15.0K
在细胞培养中进行糖甘/蛋白稳定同位素标记,以使同时的定量糖基/蛋白质基/糖基蛋白质基能够进行标记
Peilin Jiang1, Wenjing Peng1, Jingfu Zhao1
1Department of Chemistry and Biochemistry, Texas Tech University, Lubbock, Texas 79409, United States.
Analytical chemistry
|October 16, 2023
概括
一种名为Glycan Protein 稳定同位素在细胞培养中的标记 (GlyProSILC) 的新方法允许同时标记甘氨酸和蛋白质. 这在细胞培养系统中推进了定量糖组学和蛋白组学.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 蛋白质糖化分析由于异质性而复杂.
- 现有的LC-MS方法和像SILAC这样的代谢标签对糖性成分有局限性.
- 精确量化甘氨酸和蛋白质对于生物研究至关重要.
研究的目的:
- 开发一种新的代谢同位素标记策略,用于同时量化甘氨酸和蛋白质.
- 在细胞培养中引入甘氨酸蛋白稳定同位素标记 (GlyProSILC) 作为应对甘氨酸和蛋白质组挑战的解决方案.
- 在细胞培养系统中验证GlyProSILC的效率和准确性.
主要方法:
- 细胞在含有胺-15N-氨酸,13C6-氨酸 (Arg6) 和13C6-15N2-氨酸 (Lys8) 的重介质中进行培养,以获得GlyProSILC标签.
- 进行了转录组,糖组和蛋白组分析,以评估标记后的代谢变化.
- 液体染色学-质谱学 (LC-MS) 用于同时量化甘氨酸,蛋白质和糖.
主要成果:
- 格莱SILC标签并没有显著改变细胞系代谢.
- 实现了高标签效率和定量精度.
- 同时量化62个N-甘氨酸,574种蛋白质和344种糖,使用相同的细胞批量进行.
结论:
- GlyProSILC是一种有效的代谢标记策略,用于同时定量甘氨酸和蛋白质.
- 这种方法克服了以前在葡萄糖和蛋白质组分析方面的技术的局限性.
- 在细胞培养中,GlyProSILC提供了一种准确的定量糖组学,蛋白组学和糖组学方法.
