人类脑脊液样本的准备和注释,用于综合性脂管学和代谢学分析研究
Kourosh Hooshmand1, Jin Xu2, Anja Hviid Simonsen3
1System Medicine, Steno Diabetes Center Copenhagen, Herlev, Denmark.
Molecular neurobiology
|October 16, 2023
概括
开发一种强大的方法来分析脑脊液 (CSF) 中的脂质和代谢物对于理解神经退行性疾病至关重要. 酸性Bligh和Dyer (aB&D) 提取方法在CSF中全面的脂质和代谢物分析中被证明是最有效的.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 生物化学 生物化学
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 脑脊液 (CSF) 对于研究神经退行性疾病至关重要,因为它的代谢多样性.
- 在CSF中分析脂质和代谢物是具有挑战性的,因为它们的结构复杂性和广泛的动态范围.
- 目前基于质谱 (MS) 的技术需要改进的方法来进行全面的分析.
研究的目的:
- 开发和验证一种可靠的方法,同时从人类脊髓液样本中提取脂质和代谢物.
- 为了比较不同双相提取系统的效率,用于脂组学和代谢学.
- 为CSF生物流体分析建立一个全面的分析工作流.
主要方法:
- 四种双相提取方法的比较:Folch,Bligh和Dyer (B&D),Matyash,以及酸性Folch和B&D (aFolch和aB&D).
- 用了150μL的人类脑脊液样本进行提取.
- 采用多种色谱技术,包括逆相液态色谱 (RPLC),水友相互作用液态色谱 (HILIC) 和气体色谱 (GC) 与MS/MS和QTOF MS相结合.
主要成果:
- 酸性Bligh和Dyer (aB&D) 方法证明了脂质提取的最高可重现性 (RSD <15%).
- aB&D和B&D方法显示出更高的提取功率和更高的峰值强度,用于脂质标准.
- 使用RPLC-MS/MS,HILIC-MS/MS和GC-QTOF MS的组合,共注释了674种独特的代谢物.
结论:
- aB&D提取方法非常适合用于人类脑脊液的全球脂管学分析,提供优异的覆盖范围,可重复性和效率.
- 将aB&D提取与RPLC-MS/MS脂管学和补充的HILIC/GC方法相结合,可实现全面的代谢物特征发现.
- 这种经过验证的工作流可以显著帮助研究神经退行性疾病和其他神经疾病的临床研究.
