开发一种LC-MS/MS方法,通过评估依赖于消化效率的方法来绝对量化IgG4,使用非可切割/可双切割内部校准器集来评估消化效率的依赖性
Daisuke Sasaki1, Haruka Kashiwagura1, Yuya Teruuchi1
1Medical R&D Center, Nitto Boseki Co., Ltd., Koriyama, Japan.
Biochemical and biophysical research communications
|October 16, 2023
概括
准确测量免疫球蛋白G4 (IgG4) 对于诊断IgG4相关疾病至关重要. 本研究提出了一种强大的LC-MS/MS方法,用于精确的IgG4量化,克服消化效率变化的挑战.
科学领域:
- 临床化学 临床化学
- 质谱测量质量谱测量
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 精确的血清免疫球蛋白G4 (IgG4) 测量对于诊断IgG4相关疾病至关重要.
- 缺乏普遍接受的参考材料阻碍了可靠的IgG4测试,原因是测试的可变性.
- 蛋白质溶解消化效率是影响IgG4定量准确性的关键因素.
研究的目的:
- 开发和验证液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,以绝对量化IgG4.4.
- 为了解决有关蛋白质溶解消化效率对测定可靠性的影响的担忧.
- 建立用于验证IgG4参考材料的基础.
主要方法:
- 开发一种LC-MS/MS方法,使用内部校准器套装,以同位素标记IgG4.4特定的为标记.
- 包括不可切割和可双切割的,以准确确定蛋白质溶解消化效率.
- 选择基于选择性,稳定性和可识别性的代理,通过素或基内酶消化生成.
主要成果:
- 开发的LC-MS/MS方法在不同酶的IgG4量化中显示出高精度,相对差异≤6.1%.
- 这种方法即使在消化效率低 (<20%),也被证明是可靠的,在既定的日间精度限制内保持精度 (CV ≤6.9%).
- 量化结果是一致的,不管蛋白质溶解消化效率的变化.
结论:
- 开发的LC-MS/MS方法为绝对IgG4量化提供了强大可靠的方法.
- 该方法可用于验证IgG4的参考材料,解决临床诊断中的关键需求.
- 这种方法减轻了消化变化的影响,提高了IgG4测量的准确性.
