在Pichia pastoris GS115表达系统中,从Tachypleus gigas中产生子优化的C因子片段,用于内毒素检测
Zubaidi Bachtiar1, Apon Zaenal Mustopa2, Rika Indri Astuti3,4
1Post Graduate Program of Biotechnology, Bogor Agricultural University, Bogor, Indonesia.
Journal, genetic engineering & biotechnology
|October 17, 2023
概括
因子C蛋白碎片是用于内毒素检测的有效生物传感器. 分子模拟证实了与脂质A的稳定相互作用,并优化了对潜在生物标志物发展的复合表达.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- C因子 (FC) 是一种关键的细胞原蛋白蛋白酶,用于内毒素测试.
- FC充当生物传感器,通过其与脂质A的C型乳素域 (CLECT) 相互作用检测脂多糖.
- 之前的研究表明,通过分子对接和动力学,CLECT-脂质A相互作用.
研究的目的:
- 评估C因子碎片与脂质A之间的相互作用的稳定性.
- 为了建模C因子结构,并分析其与脂质A连接体的相互作用.
- 为了优化复合因子C片段的异质表达.
主要方法:
- 使用在线工具 (AlphaFold,ERRAT,3D Verify) 进行蛋白质结构建模.
- 分子对接模拟以确定与脂质A变体的结合点和相互作用.
- 分子动力学 (MD) 模拟用于评估水性环境中的复杂稳定性.
- 在Pichia pastoris中优化重组蛋白表达.
主要成果:
- 基于Ramachandran和ERRAT分析,AlphaFold服务器提供了最准确的C因子模型.
- 对接模拟显示,FC片段与受体区域结合,激活FC蛋白与各种脂质A连接体.
- MD模拟证实了所有模拟的FC-脂质A复合物的稳定性.
- 优化表达条件需要在30°C的1%甲醇下进行72小时的诱导.
结论:
- C因子碎片显示出作为内毒素检测生物标志物的潜力.
- 分子对接和MD模拟验证了FC碎片和脂质A之间的复杂形成.
- 获得了成功的FC片段异质表达.
- 优化的表达条件 (1%甲醇,30°C,72h) 适合大规模的重组FC片段生产.
