克隆,测序,表达和净化从两个人类Demodex物种中分离出来的阿斯巴达蛋白酶
Li Hu1, Chenglin Guan1, Yae Zhao1
1Department of Pathogenic Biology and Immunology, School of Basic Medical Sciences, Xi'an Jiaotong University Health Science Center, Xi'an, China.
International journal of biological macromolecules
|October 17, 2023
概括
这项研究为Demodex aspartic蛋白酶 (ASP) 建立了第一个 prokaryotic表达系统,这些酶在寄生虫入侵中至关重要. 这种系统使得进一步研究Demodex虫的病原性机制成为可能.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 寄生虫学的寄生虫学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 酸蛋白酶 (ASP) 是重要的酸酶,促进寄生虫侵入宿主组织.
- 了解Demodex ASPs对于调查虫病原性至关重要.
- 这项研究是对Demodex ASP的首次调查.
研究的目的:
- 克隆,测序和分析Demodex ASP的物理和化学特性.
- 为复合DemodexASP (rASP) 建立一个 prokaryotic表达和净化系统.
主要方法:
- 放大,克隆和测序Demodex ASP编码序列 (CDS) 的编码序列.
- 蛋白质性质的生物信息分析,包括遗传学和保存模式分析.
- 构建 prokaryotic 表达系统 (His-tag 和 GST-tag) 和净化重组蛋白质.
主要成果:
- 确定了Demodex folliculorum和D. brevis ASP的CDS长度 (分别为1161bp和1173bp).
- 再组合的ASP蛋白具有大约40KDa的分子量,含有关键的功能部位,但缺乏跨膜域.
- 遗传学分析揭示了D. folliculorum和D. brevis ASP与其他形动物物种的明显集群.
- 成功构建和净化复合ASP (rASP-His和rASP-GST) 使用优化的再生和净化协议.
结论:
- 该研究成功地建立了一个强大的 prokaryotic 表达和净化系统的 Demodex rASP.
- 这个系统为深入研究Demodex虫的致病机制提供了基础.
