在患有囊性赤道球菌病的绵羊血清样本中敏感检测特定的无细胞DNA
Mahboubeh Hadipour1, Hossein Yousofi Darani1, Hamid Talebzadeh2
1Department of Parasitology and Mycology, School of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran.
PLoS neglected tropical diseases
|October 19, 2023
概括
通过增加血清体积和DNA模板来优化PCR,以及使用半嵌套PCR,显著提高了埃奇诺科克DNA检测灵敏度,达到95%. 这种改进的方法有助于诊断绵羊和潜在的人类球菌病.
科学领域:
- 兽医寄生虫学 兽医寄生虫学
- 分子诊断学 分子诊断
- 传染病研究 传染病研究
背景情况:
- 乙球菌病的诊断需要更敏感的检测方法.
- 羊血清中的 Echinococcus granulosus sensu lato 的无细胞DNA (cfDNA) 是诊断的目标.
- 目前对球菌病的诊断方法缺乏足够的敏感性.
研究的目的:
- 为了研究PCR试验,以敏感检测感染羊血清中的 Echinococcus cfDNA.
- 优化PCR条件,以提高球菌病诊断的灵敏度.
主要方法:
- 用于从绵羊血清 (0.5毫升和2毫升体积) 中提取cfDNA的修改过的烯甲法.
- 标准和半嵌套的PCR针对NADH脱基酶子单元I基因被采用.
- 使用不同的DNA模板体积 (5μl和10μl) 进行了放大评估.
主要成果:
- 半嵌套PCR检测了12/35只羊使用0.5毫升血清检测到 Echinococcus DNA,而27/35只羊使用2毫升血清.
- 增加DNA模板体积进一步提高了检测率.
- 优化的PCR协议实现了95%的灵敏度,由测序证实.
结论:
- 较大的血清量,增加的DNA模板和半嵌套的PCR协议显著提高了PCR敏感性以检测 Echinococcus.
- 开发的PCR方法对在绵羊和人类中诊断球菌病有前途.
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