尿液-HILIC:在临床蛋白质学中用于自动化样品制备,用于自下而上的尿蛋白质组概况

科学领域:

• 临床蛋白质组学 临床蛋白质组学
• 发现生物标志物的发现.
• 尿液分析 尿液分析

背景情况:

• 尿液是健康状况评估和临床蛋白质组学的宝贵生物流体.
• 现有的尿样制备方法缺乏大规模临床研究的吞吐量.

研究的目的:

• 开发一种新的,高通量尿样准备工作流程 (uHLC).
• 应用 uHLC 工作流程来识别急性损伤 (AKI) 的蛋白质生物标志物.

主要方法:

• 开发了使用在珠子上捕获和消化蛋白质的尿液-性相互作用液体染色学 (uHLC).
• 在KingFisherTM Flex系统上使用MagReSyn® HILIC微球进行自动样本制备.
• 在数据独立获取 (DIA) 模式下通过LC-MS/MS分析,并在SpectronautTM 17中搜索数据.

主要成果:

• 在 uHLC 工作流程中,表达了与膜上方法相比较的/蛋白质识别,但手动时间缩短,手动步骤更少.
• 在技术复制品中,HHLC的变化系数较低,表明可复制性得到改善.
• 在AKI患者中鉴定出121种显著差异丰富的蛋白质,其中12种符合严格的过标准 (≥8.35倍变化,≥2个独特的,≤1%的FDR).

结论:

• 新的 uHLC 工作流是高效的,可重复的,适合高通量临床蛋白质学.
• 鉴定出来的蛋白质为AKI患者的尿蛋白提供了洞察力.
• 建议使用这种高通量方法在更大的队列中进行进一步验证.