对人类冠状病毒HCoV-OC43,HCoV-229E和HCoV-NL63进行改进的培养方法
Alejandra Fausto1,2, Clayton J Otter1,2, Nicole Bracci1,2
1Department of Microbiology, Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, Philadelphia, Pennsylvania.
Current protocols
|October 26, 2023
概括
研究人员开发了新的协议,以有效地生长和量化季节性人类冠状病毒 (HCoV),如HCoV-OC43,HCoV-229E和HCoV-NL63. 这些改进的方法使得高位病毒的产生成为可能,以便更好地研究这些常见的呼吸道病原体.
科学领域:
- 病毒学 病毒学
- 微生物学 微生物学
- 传染性疾病 传染性疾病
背景情况:
- 四种季节性人类冠状病毒 (HCoV) HCoV-OC43,HCoV-229E,HCoV-NL63和HCoV-HKU1 通常会导致轻度呼吸道疾病.
- 这些HCoV是生物安全级别2 (BSL-2) 病原体,使它们成为研究更危险的冠状病毒如SARS-CoV,MERS-CoV和SARS-CoV-2的有价值的替代品.
- 之前的研究在培养季节性HCoV方面面临挑战,原因是缺乏通用系统和难以产生高位传染性库存.
研究的目的:
- 为季节性HCoVs的传播和量化开发和呈现优化的协议.
- 确定特定的不朽细胞系,最大限度地提高HCoV-OC43,HCoV-229E和HCoV-NL63.3的复制能力.
- 为了使这些常流传的HCoVs能够产生高位的传染性库存.
主要方法:
- 开发用于生长和量化传染性HCoV粒子和病毒RNA的新型试验.
- 确定HCoV复制的最佳不朽细胞系:HCoV-OC43的Vero E6,HCoV-229E的Huh-7,以及HCoV-NL63的LLC-MK2.
- 建立HCoV生长,斑块检测,RNA量化和基于超离心的度的协议.
主要成果:
- 成功开发了对HCoV-OC43,HCoV-229E和HCoV-NL63的传染性病毒和病毒RNA生长和定量测试方法.
- 特定细胞系 (Vero E6,Huh-7,LLC-MK2) 的鉴定,这些细胞系显著增强了这三个HCoVs的复制量.
- 证明了传播和量化的改进方法,促进了传染性季节性HCoVs的更高产量.
结论:
- 该研究提出了用于增强季节性HCoVs的增强传播和量化验证的协议.
- 这些优化的方法克服了以前的局限性,允许生成高位病毒库存.
- 这些发现将有助于研究人员使用季节性HCoVs作为可访问的模型来研究冠状病毒生物学和病原性.
