CRISPR-Cas9 KO 细胞系生成和开发用于 rAAV-FKRP 基因治疗的基于细胞的功效测试
Marine Geoffroy1,2, Louna Pili1,2, Valentina Buffa1,2
1Généthon, 91000 Evry-Courcouronnes, France.
Cells
|October 27, 2023
概括
一种使用FKRP淘汰细胞和On-Cell-Western方法的新的基于细胞的测定方法有效地测量了用于肢体带肌肉缩R9.9的基因治疗的生物活性. 这种测试可以确保基因疗法产品的质量和一致性.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 细胞生物学 细胞生物学
背景情况:
- 肢带肌肉缩症R9 (LGMDR9) 是一种由福库丁相关蛋白 (FKRP) 缺陷引起的肌肉缩症,损害α-DG糖化和膜完整性.
- 复合腺相关病毒载体 (rAAV) 基因疗法对LGMDR9具有前景,目前正在进行1/2期临床试验.
- 监管部门的批准要求进行严格的质量控制,包括强度测试,以证明基因疗法产品的生物效应.
研究的目的:
- 开发和验证用于rAAV-FKRP基因治疗的基于细胞的功效测试.
- 评估FKRP转基因的功能活性和生物效应.
- 确保临床使用的rAAV-FKRP基因疗法产品的质量和一致性.
主要方法:
- 使用CRISPR-Cas9.9生成了缺乏α-DG糖化酶的FKRP淘汰 (KO) 细胞.
- 开发了一种高通量在细胞上的西方方法来评估α-DG糖化复原.
- 确定半最大有效度 (EC50) 以量化生物活性和比较批次.
主要成果:
- 成功生成了具有完全α-DG糖化缺陷的FKRPKO细胞.
- 建立了一种可靠的On-Cell-Western试验,以测量FKRP基因疗法的功能活性.
- 证明了该试验能够量化生物活性,并作为批量比较的功效试验.
结论:
- 结合高通量On-Cell-Western的FKRP KO肌肉细胞,为rAAV-FKRP基因治疗提供了基于细胞的强度测试.
- 这种测定对于在临床开发中证明产品活性,质量和一致性至关重要.
- 开发的方法支持对基因疗法产品特征的监管要求.
