从子快速动肌肉中分离了 Sarcoplasmic Reticulum Ca2+-ATPase 的细胞
Miguel A Rivera-Morán1, José G Sampedro1
1Instituto de Física, Universidad Autónoma de San Luis Potosí, Avenida Chapultepec 1570, Privadas del Pedregal, San Luis Potosí 78295, Mexico.
Methods and protocols
|October 27, 2023
概括
在净化过程中,三醇稳定了 Sarcoendoplasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA),产生一种纯净且活性的酶. 这种方法增强了不稳定的膜蛋白的分离,以便进一步进行结构和抑制剂研究.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 膜蛋白生物化学 膜蛋白生物化学
- 酶稳定 酶稳定 酶稳定
背景情况:
- 在没有离子的净化过程中, Sarcoendoplasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA) 容易发生不稳定.
- 众所周知,三糖是一种分糖,可以稳定蛋白质,特别是在细胞应激条件下.
研究的目的:
- 为了研究三糖在净化过程中稳定SERCA的有效性.
- 描述纯化的SERCA的生物化学和生物物理特性.
- 评估三糖净化的SERCA是否适合进行进一步的研究.
主要方法:
- 在三糖的存在下净化SERCA.
- 测定ATPase活性和确定动力参数 (Km为ATP).
- 光素异硫酸 (FITC) 标签,以确认ATP结合部位的完整性.
- 循环二重化 (CD) 光谱法用于分析ATP结合时的结构变化.
主要成果:
- 高纯度 (~95%) 和显著的ATPase活性纯化的SERCA是通过trehalose实现的.
- ATP的水解是Ca2+依赖的,ATP的动力学是过度的 (Km = 12.16 ± 2.25 μM).
- 通过FITC标签和CD光谱,证实了ATP结合部位的完整性和核酸依赖的结构重组.
结论:
- 在净化过程中,三醇有效地稳定了SERCA,保持了其活性和结构完整性.
- 净化后的SERCA适用于结构和联结结合的研究,包括抑制剂查.
- 醇是净化不稳定的膜酶如SERCA的宝贵添加剂.
关键词:
结合ATP与ATP的结合方式在Ca2+-ATP酶中.P型的ATP酶是一种P型的ATP酶.这就是 SERCA SERCA.一个圆形的二重化.酵素净化酶的净化过程酶稳定酶的稳定性光标签的使用方法这是一种三糖.通过超离心法进行超离心.更多相关视频
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