一个实时重组聚合酶放大试验,用于特定检测块性皮肤疾病病毒
Qi Zhai1, Xia Zhou1, Liyin Du2
1Institute of Animal Health, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Livestock Disease Prevention of Guangdong Province, Scientific Observation and Experiment Station of Veterinary Drugs and Diagnostic Techniques of Guangdong Province, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Guangzhou 510640, China.
一种新的实时重组聚合酶放大 (RPA) 方法提供了简单,快速和特定的块性皮肤疾病病毒 (LSDV) 检测. 这种敏感的测试可以将LSDV与疫苗菌株区分开来,有助于在流行地区的临床诊断.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 动物健康经济学 动物健康经济学
背景情况:
- 结块性皮肤病病毒 (LSDV) 由于动物生产力下降和皮肤质量下降,导致牲畜遭受重大经济损失.
- 使用异种减弱的山羊水病毒 (GTPV) 疫苗菌株使LSDV诊断复杂化.
- 现有的LSDV检测方法往往缺乏特异性,无法区分现场菌株和疫苗菌株.
研究的目的:
- 开发一种简单,快速和特定的诊断方法,用于块性皮肤疾病病毒 (LSDV).
- 为了区分LSDV与减弱的山羊天花病毒 (GTPV) 疫苗 (AV41菌株).
- 为在中国建立一种用于临床诊断和检测LSDV的敏感试验.
主要方法:
- 开发一种实时重组酶聚合酶放大 (RPA) 试验,针对LSDV ORF132基因的保存区域.
- 设计用于实时RPA方法的特定启动器和探针.
- 使用已知的病毒核酸和临床样本验证试验的灵敏度,特异性和交叉反应性.
主要成果:
- 实时RPA测定检测到LSDV,检测极限 (LOD) 为15个副本/μL.
- 该方法的特异性很高,没有与山羊天花病毒,牛感染性鼻炎病毒,Pasteurella multocida或牛健康组织发生交叉反应.
- 在43个临床样本中,实时RPA和WOAH推的实时PCR方法之间的一致性很高 (kappa值=0.94).
结论:
- 开发的实时RPA方法对LSDV检测具有高度敏感性和特异性.
- 这种测试提供了一个快速 (在20分钟内) 和可靠的工具来区分LSDV和GTPV疫苗菌株.
- 该方法在中国的临床诊断和LSDV监测中具有广泛应用的巨大潜力.
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