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用体外转录的Cas9mRNA编辑纤维细胞的协议,以及通过优化的GUIDE-seq
Zhuokun Li1, Ganna Reint1, Emma Maria Haapaniemi1
1Centre for Molecular Medicine Norway, University of Oslo, Oslo, Norway.
STAR protocols
|October 27, 2023
概括
使用信使RNA (mRNA) 的CRISPR-Cas9基因编辑提供了短暂的DNA修饰. 本研究介绍了一种编辑纤维细胞和监测Cas9指导RNA脱效应的协议,使用GUIDE-seq.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- CRISPR-Cas9是一种强大的基因编辑工具.
- 通过mRNA传递Cas9是有希望的,因为它是短暂的.
- Cas9导向RNA的非目标效应需要仔细监测.
研究的目的:
- 提出使用体外转录的Cas9mRNA编辑纤维细胞的修订方案.
- 为了描述这种基因编辑方法的非目标效应.
- 为了验证优化的GUIDE-seq技术用于监测非目标突变.
主要方法:
- 纤维细胞培养和转染与体外转录的Cas9mRNA.
- 优化高分辨率目标外分析的GUIDE-seq方法.
- 对测序数据的生物信息分析,以确定非目标裂变地点.
主要成果:
- 修订后的协议成功地编辑了纤维细胞DNA与暂时的Cas9表达.
- 优化的GUIDE-seq方法有效地识别和量化了目标之外的裂变事件.
- 该研究提供了一种强大的方法来评估基于mRNA的CRISPR-Cas9基因编辑的安全性.
结论:
- 由mRNA传递的Cas9是一种可行的过渡基因编辑策略.
- 本文所介绍的协议和GUIDE-seq优化使得对非目标效应进行可靠的监测.
- 这种方法对于推进CRISPR-Cas9技术的临床前应用至关重要.