开发一种抗HER2单链可变抗体碎片结构,用于大肠杆菌中高产量的可溶性表达和一步染色学净化
Kyu Tae Byun1, Boram Kim1, Junmin Cho1
1Department of Biotechnology, Research Institute (RIBHS), College of Biomedical and Health Science, Konkuk University, Chungju 27478, Republic of Korea.
Biomolecules
|October 28, 2023
概括
一种新的v24结构有效地产生可溶性抗人类表皮生长因子受体2 (HER2) 单链变量片段 (scFv) 在大肠杆菌中. 这种方法确保了潜在的癌症治疗和诊断的高产量和纯度.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
背景情况:
- 单链可变片段 (scFv) 是一种多功能复合抗体支架.
- 在大肠杆菌中scFv的过度表达往往导致包容体的形成,阻碍生产.
研究的目的:
- 开发一种有效的方法来生产可溶性抗HER2 scFv.
- 为了确定高产量,可溶性抗HER2 scFv生产的最佳结构.
主要方法:
- 测试了四种结构 (v21-v24) 用于在大肠杆菌中产生抗HER2 scFv.
- 使用的N端糖结合蛋白 (MBP) 融合和烟草蚀刻病毒 (TEV) 蛋白酶裂变.
- 采用单步亲和染色学来进行净化.
主要成果:
- 具有MBP-TEV融合的v24构造被证明是最有效的可溶性scFv生产.
- 实现了高产量的可溶性表达,scFv被内源TEV释放出来.
- 纯化scFv表现出对HER2的纳米分子亲和力,并在一个月内保持稳定.
结论:
- v24构造为制造反HER2 scFv提供了一个高效的系统.
- 这种方法促进了基于抗HER2 scFv的癌症治疗和诊断的发展.
- 优化的生产策略适用于各种工业应用.
