通过CRISPR-Cpf1系统在Saccharomyces cerevisiae中引入一种仅用RNA治疗等离子体的方法

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 合成生物学 合成生物学

背景情况:

• 克里斯普尔-卡斯系统是基因组编辑的多功能工具,通常使用质粒进行卡斯蛋白和指导RNA表达.
• 一个显著的限制是这些等离子体在编辑后的宿主细胞内的持久性,需要有效的等离子体去除策略.
• 开发一般的等离子体固化方法对于推进CRISPR-Cas应用至关重要,特别是用于产生无痕编辑.

研究的目的:

• 开发和验证一种CRISPR介导的系统,以有效地去除*Saccharomyces cerevisiae*中的等离子体.
• 建立适用于各种宿主生物体的可通用等离子体治愈策略.
• 为了实现无痕的基因组编辑,并促进代基因编辑过程.

主要方法:

• 在*Saccharomyces cerevisiae*中利用了以前建立的CRISPR-Cpf1基因组编辑系统.
• 设计的CRISPRRNA (crRNA) 针对CRISPR-Cpf1等离子体的复制起源.
• 利用单链DNA (ssDNA) 作为同源重组的模板,以促进等离子体切除.

主要成果:

• 使用联合crRNA和ssDNA策略实现了高等离子体固化效率96 ± 4%.
• 使用仅一个crRNA演示了一个简化的系统,达到约70%的固化效率.
• 验证了CRISPR介导的等离子体固化系统作为一种快速,简单和有效的方法.

结论:

• 一个新的CRISPR介导的等离子体固化系统已经成功开发和演示.
• 只有RNA的等离子体固化系统可以通过设计针对等离子体复制起源的特定crRNA来适应不同的宿主生物.
• 这项技术促进了无痕基因组编辑,并支持代基因编辑工作流程,没有剩余的外来遗传元素.