长期压力单克隆抗体的特定站点结构变化通过DEPC共价标记和定量质谱检测揭示

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 蛋白质化学 蛋白质化学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 了解压力下的单克隆抗体 (mAb) 结构变化对于药物稳定性至关重要.
• 识别降解热点允许针对性蛋白质工程来增强稳定性.

研究的目的:

• 为了评估模型mAb (SILuMAb) 中的结构变化,使用基于二甲基二氧化碳酸盐 (DEPC) 的共价标记质谱法 (CL-MS).
• 评估DEPC-CL-MS在识别抗体降解和结构障碍方面的实用性.

主要方法:

• 采用基于二甲基碳酸盐 (DEPC) 的共价标记质谱法 (CL-MS).
• 热应力和长期储存 (2年2-8°C) 应用于SILuMAb样本.
• 用紫外线检测 (SEC-UV) 的尺寸排除色谱进行比较.

主要成果:

• DEPC-CL-MS证实了热应激 mAbs.中的特定氨基酸位置的结构变化.
• 在热应激SILuMAb.b的CDR中确定了一个容易聚合的区域.
• 在长期存储的mAbs中,DEPC-CL-MS精确地确定了特定的囊蛋白中的二硫化键干扰,补充了SEC-UV的发现.

结论:

• 基于DEPC的CL-MS对于量化结构变化和确定mAbs.中的降解热点是有效的.
• 该方法准确地检测结构干扰,包括二硫化物键的重新排列.
• DEPC-CL-MS作为一个有价值的工具来补充其他评估mAb结构稳定性的方法.