乳杆菌菌体内素及其功能域的表征-潜在的活生物治疗试验试剂
Robert J Dorosky1, Stephanie L Lola1, Haleigh A Brown1
1Office of Vaccines Research and Review, Division of Bacterial, Parasitic, and Allergenic Products, Center for Biologics Evaluation and Research, U.S. Food and Drug Administration, Silver Spring, MD 20993, USA.
菌体内素显示出测试活生物治疗产品 (LBPs) 的潜力. 它们的细胞壁结合域 (CBD) 可以评估功效,而它们的溶解活性可以确定纯度,提供新的生物技术应用.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 微生物学 微生物学
- 药物开发 药物开发
背景情况:
- 活生物疗法产品 (LBPs) 含有乳酸细菌 (LAB) 等活生物体,需要进行强大的功效和纯度测试.
- 菌体内素是降解细菌细胞壁的酶,具有与生物技术应用相关的特定结合和溶解活性.
研究的目的:
- 研究乳杆菌内溶酶细胞壁结合域 (CBD) 对活生物疗法产品 (LBP) 功效测试的潜力.
- 为了评估内素及其酶域 (EAD) 的溶解活性,进行LBP纯度测试.
主要方法:
- 从五种乳杆菌菌素 lysins (CL1,Jlb1,Lj965,LL-H,ΦJB) 的CBD进行了表征,以结合27个LAB菌株的亲和力.
- 利用与CBD结合的流细胞计量来计算混合物中可活性的细菌数量.
- 评估了内素和EADs对LAB的细胞壁消化和溶解活动.
主要成果:
- CBDs表现出与LAB的差异性结合,与甘油或表面聚合物相互作用.
- 基于CBD的流细胞计成功地列出了可活的细菌菌株.
- CL1-lys, jlb1-lys 和 ΦJB-lys,以及它们的 EAD,表现出细胞壁对 LAB 的消化和溶解活性.
- Jlb1-EAD和ΦJB-EAD对pH和NaCl变化的敏感性比各自的全解更大.
- 与FJB-lys.相比,FJB-EAD表现出增强的化活性.
结论:
- 恩多利辛CBDs显示为LBP功效测试试剂的试剂有希望.
- CL1-lys,jlb1-lys 和 ΦJB-lys 和它们的 EAD 的溶解活性表明它们适合开发 LBP 纯度测定.
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