用双路西法酶记者系统对SACL转录的西伦特异性热精胺依赖翻译的量化
Anna Solé-Gil1, Cristina Úrbez1, Alejandro Ferrando1
1Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas (CSIC-Universitat Politècnica de València), Valencia, Spain.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|October 28, 2023
概括
热胺 (Tspm) 通过克服SACLmRNAs的5'-主导体中的抑制剂来增强基因翻译. 这项研究开发了一种双 luciferase 试验,以量化 Tspm 对植物 SACL3 转录的积极翻译效应.
科学领域:
- 植物分子生物学 植物分子生物学
- 分子遗传学 分子遗传学
- 生物化学 生化学
背景情况:
- 热精氨酸 (Tspm) 是一种重要的聚氨酸,可以调节 Arabidopsis thaliana.的体发育.
- 通过调节SACL基因的翻译,TSPM影响基因表达,通过它们的5'-领导区域的cis-调节元素来调节基因的翻译.
研究的目的:
- 建立和验证一种方法来评估SACL mRNA 5'-领导者的Tspm-依赖的翻译调节.
- 量化TSPM对SACL3转录的翻译效率的影响.
主要方法:
- 在Nicotiana benthamiana叶和Arabidopsis thaliana mesophyll原生体中使用双 luciferase 记者测定系统.
- 采用了一种经过修改的pGreenII 0800 LUC等离子体 (pGreen2x35SLUC),其中包含与火 luciferase 基因融合的 SACL3 5'-leader 序列.
- 应用模拟或TSPM处理,然后使用光度计测量发光.
主要成果:
- 成功量化了TSPM对SACL3 5'-leader驱动的火 luciferase的翻译的积极影响.
- 通过抵消抑制性cis元素,证明了TSPM在促进翻译中的作用.
结论:
- 开发的双化酶试验有效地研究了植物系统中Tspm介导的转化控制.
- 热精氨酸显著增强SACL3转录的翻译,突出其在基因表达中的调节作用.
