通过向液体染色学-并联质谱法对谷氨通路细胞代谢物的定量分析

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 细胞生物学 细胞生物学

背景情况:

• 细胞氧化还原稳定至关重要,涉及谷氨和醇代谢产物.
• 精确分析这些代谢物是具有挑战性的,因为在样品处理过程中还原氧相互转换.
• 现有的方法可能无法充分保存醇-氧化物状态.

研究的目的:

• 开发一种快速而准确的方法来分析谷氨途径中的14种代谢物.
• 为了克服在分析过程中与醇-氧化状态不稳定性相关的挑战.
• 为了使细胞样本中的谷氨及其中间体的高吞吐量量化.

主要方法:

• 采用了向液体染色学-双重质谱法 (LC-MS/MS) 的方法.
• 用于快速衍生物化,以稳定醇-氧化物状态的N-乙基胺 (NEM).
• 分析使用了2μm以下表面多孔的水友相互作用液体染色学 (HILIC) 列和多重反应监测 (MRM) 模式中的三重四极MS.
• 一种13C标记的细胞提取物作为校准的内部标准.

主要成果:

• 该方法准确量化了14种谷氨途径代谢物.
• 在低纳米分子范围 (5-25 nM) 中实现了量化极限.
• 3分钟的短运行时间允许对细胞样本进行高吞吐量分析.
• 该方法在准确性和精度方面得到了验证.

结论:

• 一种经过验证的,快速的LC-MS/MS方法有效地分析了谷氨途径代谢物.
• 通过NEM衍生策略,成功地稳定了醇-氧化物状态.
• 这种方法可方便在细胞中准确,高通量地确定谷氨及其中间体,有助于氧化还原平衡研究.