相对常规和超分辨率光激活定位显微镜 (PALM) 成像以描述活哺乳动物细胞中的染色质结构和动态

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 遗传学 遗传学 是一个
• 生物物理学的生物物理.

背景情况:

• 了解基因调节需要对染色体空间组织和动态进行定量分析.
• 超分辨率显微镜,像光激活局部化显微镜 (PALM),提供~20纳米分辨率,但在活细胞中受到运动模糊的限制.
• 以前的方法无法在活细胞中获得高分辨率的测量,原因是长时间的获取时间和色素运动.

研究的目的:

• 介绍一种与常规光和PALM在活细胞中的相关成像端粒的协议.
• 为了使时间平均超分辨率图像和活细胞中的动态参数获取.
• 为了克服超分辨率染色体显微镜中运动模糊的局限性.

主要方法:

• 开发了一种使用常规光和PALM的相关成像的逐步协议.
• 将单个分子定位分配给移动的位置,以区分结合和未结合的dCas9分子.
• 通过从绑定分子定位中减去端粒轨迹来纠正运动模糊.

主要成果:

• 在活细胞中实现了高分辨率的染色质结构表征.
• 能够区分具有重叠流动性的绑定和未绑定dCas9分子.
• 与局部色素运动和更大规模域运动相关的结构参数.

结论:

• 该协议增强了对染色质流动性和时间平均纳米结构的分析,具有单分子灵敏度.
• 这种方法提高了研究活细胞中特定位置的染色质组织和动态的能力.
• 开发的方法克服了动态生物系统超分辨率显微镜的先前局限性.