在中国仓鼠卵巢细胞中评估复合腺相关病毒的产生
Thu M Cao1, Dayue Chen2, Gavin C Barnard1
1Department of Cell Culture Bioprocess Operations, Genentech, Inc., South San Francisco, California, USA.
Biotechnology and bioengineering
|October 30, 2023
概括
中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞可以产生复合腺相关病毒 (rAAV) 具有优化的帽子蛋白表达. 这项研究表明,CHO细胞是rAAV生产的可行的宿主,可以达到与既有方法相比较的高病毒位.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 基因治疗 基因治疗
- 细胞线发展发展 细胞线发展
背景情况:
- 基因治疗的进步导致FDA批准了复合腺相关病毒 (rAAV) 产品.
- 越来越多的RAAV需求需要探索替代的,强大的生产系统.
- 中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞是生物制药制造的成熟宿主.
研究的目的:
- 调查使用CHO细胞用于rAAV生产的可行性.
- 为了确定局限性并优化CHO细胞中rAAV的产生.
- 在CHO电池中建立大型rAAV制造的基础.
主要方法:
- 用标准AAV2Rep/Cap,助手和感兴趣的基因等离子体对CHO细胞进行过渡性等离子体转染.
- 通过添加细胞巨乳病毒 (CMV) -Cap等离子体来增强帽蛋白表达的优化.
- 用于获得最大的rAAV产量,采用了五倍转染法.
主要成果:
- CHO细胞成功地产生了rAAV,可以检测到病毒RNA,蛋白质和颗粒.
- 标封蛋白表达被确定为一个限制因素.
- 优化生产实现了高达3 x 10^8个病毒基因组的标位,每2 x 10^9个体.
- 观察到与人类胚胎 (HEK) 细胞相比的全颗粒百分比 (15%).
结论:
- CHO细胞能够产生功能性的rAAV.
- 增强帽蛋白表达对于改善CHO细胞中的rAAV标位至关重要.
- 这项研究支持CHO细胞作为rAAV制造可扩展平台的潜力.
