在无标签的多站点 DIA 实验中通过多运行对齐实现定量可重复性
Shubham Gupta1,2, Justin C Sing1,2, Hannes L Röst3,4,5
1Terrence Donnelly Centre for Cellular & Biomolecular Research, University of Toronto, Toronto, ON, Canada.
Communications biology
|October 31, 2023
概括
由于保留时间的变化,在多个仪器中保持一致的定量蛋白质组具有挑战性. 在DIAlignR中的新型多运行色谱对齐策略显著提高了大规模研究中的数据准确性和蛋白质量化.
科学领域:
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 分析化学 分析化学
- 生物信息学是一种生物信息学.
背景情况:
- 使用数据独立获取 (DIA) 的定量蛋白质组学被广泛使用,但由于在多个LC-MS/MS仪器中出现不一致的结果而受到阻碍.
- 来自不同站点的运行之间的保留时间转移会导致量化错误和数据丢失,限制并行数据采集.
研究的目的:
- 开发和评估新的多运行色谱对齐策略,以改善定量蛋白质组学.
- 为了解决多仪器,多地点 DIA 研究中不一致量化的瓶.
主要方法:
- 实施三种多运行色谱对齐策略:基于参考的星星方法,以及新的无参考MST和渐进对齐.
- 这些策略在DIAlignR工作流程中应用于各种数据集,包括金级标准,多种类和大规模等离子体样本.
主要成果:
- 与非对齐数据相比,多运行对齐可以将量化错误率降低三倍.
- 对于丰富的蛋白质,MST对齐降低了50%的跨站点变化系数 (CV).
- 对949个血运行的重新分析发现了超过50%的与胰岛素抵抗和病毒感染相关的蛋白质.
结论:
- 无参考对齐策略 (MST,渐进) 为异质LC-MS/MS研究提供了定量准确的数据矩阵.
- DIAlignR的多运行对齐提高了精度,控制了定量错误,并增加了蛋白质组覆盖范围.
- 这些方法对于在多中心协作中强大且可扩展的定量蛋白质组学至关重要.
