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Updated: Jul 11, 2025

Tractable Mammalian Cell Infections with Protozoan-primed Bacteria
Published on: April 2, 2013
对于Legionella pneumophila效应剂SidH的毒性的结构基础
Rahul Sharma1, Michael Adams1, Simonne Griffith-Jones1
1European Molecular Biology Laboratory, 71 avenue des Martyrs, 38042, Grenoble, France.
莱吉欧内拉肺炎菌效应物SidH有毒,并与大肠杆菌EF-Tu/t-RNA/GTP相互作用. 它的毒性通过破坏这些相互作用而被废除,揭示了SidH.
科学领域:
- 微生物学和分子生物学
- 结构生物学 结构生物学
背景情况:
- 肺炎杆菌 (LP) 使用300多种分泌的效应剂在宿主细胞内建立细胞内复制.
- LP 效应物 SidH 是一个大型的,功能性未表征的蛋白质,在过度表达时会表现出毒性.
- 在感染期间,SidH是临时调节的,并被LP元效应物LubX向降解.
研究的目的:
- 阐明SidH毒性的结构基础及其由LubX调节的机制.
- 了解SidH在Legionella肺炎感染期间的作用.
主要方法:
- 在2.7 Å分辨率下确定了SidH的冷电子显微镜 (cryo-EM) 结构.
- 研究了SidH与大肠杆菌EF-Tu/t-RNA/GTP三元复合物的相互作用.
- 进行了位点定向的突变发生,以破坏SidH-tRNA和SidH-EF-Tu接口.
- 评估了野生型和突变SidH在人类细胞和Acanthamoeba castellani中的毒性.
- 确定了SidH的冷-EM结构,该结构与ubiquitin结合酶LubX复合在一起.
主要成果:
- 冷-EM结构显示,SidH具有独特的α-螺旋结构,与已知的蛋白质没有同质性.
- 纯化SidH被发现与大肠杆菌EF-Tu/t-RNA/GTP三元复合体结合.
- 破坏SidH-tRNA和SidH-EF-Tu接口的突变消除了人类细胞中的SidH毒性,并减弱了A. castellani的毒性.
- SidH-LubX复合体的结构阐明了SidH受metaeffector调节的机制.
结论:
- 通过其与EF-Tu/t-RNA/GTP复合体的相互作用,SidH的毒性得到了调解.
- 这些相互作用的破坏取消了SidH的毒性及其对毒性的贡献.
- 结构和生物化学数据提供了对SidH功能及其由LubX调节的机制理解.
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