一种基于流细胞计的试验,用于调查含有初级CD4+ T细胞的SMYD5shRNA中的HIV-1表达
1Gladstone Institute of Virology, University of California San Francisco, San Francisco, CA 94158, USA; Department of Medicine, University of California San Francisco, San Francisco, CA 94143, USA.
STAR protocols
|November 5, 2023
概括
这项研究介绍了一种流细胞测量试验,用于有效地将小毛RNA (shRNA) 和HIV-1传递给CD4+T细胞. 该方法确保了高细胞活力,使得shRNA修饰细胞中HIV-1的具体研究成为可能.
科学领域:
- 免疫学 免疫学 免疫学
- 病毒学 病毒学
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 将小发针RNA (shRNA) 和HIV-1传递给具有高效率和活力的初级CD4+T细胞是很困难的.
- 主体蛋白质SMYD5是调节病毒感染的潜在目标.
研究的目的:
- 开发一种基于流细胞计的试验,用于在CD4+T细胞中高效的shRNA输送和HIV-1研究.
- 通过在CD4+T细胞中使用shRNA研究宿主蛋白SMYD5的淘汰.
- 为了分析HIV-1感染,特别是在shRNA转的CD4+T细胞内.
主要方法:
- 净化初级CD4+T细胞.
- 使用CD3/CD28Dynabeads激活CD4+T细胞.
- 质粒转化为HEK293T细胞.
- 用两种不同的病毒进行脊髓化.
- 流量细胞计分析.
主要成果:
- 成功地将shRNAs和HIV-1传递给主要的CD4+T细胞.
- 实现了高传导效率和细胞活力.
- 在含有shRNA的细胞中对HIV-1的具体分析表明.
结论:
- 开发的流式细胞计量试验有效用于研究shRNA介导的基因淘汰和CD4+ T细胞中的HIV-1感染.
- 该协议促进了基因材料和病毒的高效,高活性的传递.
- 该试验使得能够在目标细胞群中具体调查病毒动态.
