从胚胎干细胞奇梅拉或CRISPR-Cas创始人中恢复小鼠中的向突变

科学领域:

• * 发育生物学 发育生物学
• * 遗传学 遗传学是一门学科
• * 基因编辑 基因编辑

背景情况:

• *转基因小鼠的产生通常涉及胚胎干细胞 (ES) 或在植入前胚胎中进行CRISPR-Cas基因编辑.
• *在异合体状态中恢复和确定向突变对于后续研究至关重要.
• *在ES细胞模拟体和CRISPR-Cas创始体之间,繁殖方案有很大差异,需要具体的策略.

研究的目的:

• *提供全面的育种方案,从ES细胞模拟体和CRISPR-Cas创始人中建立有针对性的突变.
• * 提供关于管理遗传背景和分离等位基因的实用建议.
• * 概述后代测试和解决突变性等位基因传播故障的方法.

主要方法:

• *讨论雄性与雌性ES细胞合体的繁殖策略.
• *关于保持基因背景和分离来自马赛克CRISPR-Cas创始人的等位基因的指导.
• *对各种突变类型 (indels,误解,敲进) 的后代测试方法的描述.
• * 包含一个故障解决指南,用于故障后代生产或传输的情况.

主要成果:

• * 详细的育种方案为ES奇美拉和CRISPR-Cas创始人方法提供.
• *讨论了优化遗传背景和等位基因分离的策略.
• * 概述了识别后代不同突变类型的方法.
• * 为突变建立中常见的问题提供了故障排除步骤.

结论:

• * 通过量身定制的育种和基因定型策略,可以成功建立异合体突变小鼠菌株.
• * 必须仔细考虑创始人的遗传背景和潜在的马赛克主义.
• * 提出的方法有助于从创始动物过渡到已建立的突变小鼠谱系进行进一步研究.