改造的CHO细胞作为一种新的AAV生产平台,用于基因治疗

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 基因治疗制造业 基因治疗制造业
• 病毒载体生产病毒载体生产

背景情况:

• 基于简单疹病毒 (HSV) 的平台增强了复合腺相关病毒载体 (rAAV) 的产生,而不是三重过渡性传染 (TTT).
• 目前基于HSV的rAAV生产面临挑战:依赖昂贵的血清补充介质和使用附着的Vero细胞 (V27) 阻碍了可扩展性.
• 随机代理商对商业媒体构成风险,需要更安全,更具成本效益的替代品.

研究的目的:

• 为无血清 HSV 基的 rAAV 生产设计中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞.
• 为了解决与rAAV制造中的商业介质相关的成本和偶然代理风险.
• 开发一个可扩展的平台,使用HSV-1矢量系统生产高位数RAAV.

主要方法:

• 工程化无血清适应的CHO细胞来表达HSV-1入口受体 (HVEM和/或Nectin-1).
• 利用高通量克隆来选择一个克隆 (CHO-HV-C1),表达RHSV-1共感染的HVEM.
• 设计CHO-HV-C1细胞来表达HSV-1 CP27,以应对可扩展性的挑战.

主要成果:

• 选择的CHO-HV-C1克隆在感染后24小时内实现了各种rAAV载体的高病毒基因组拷贝标位 (高达4.07 × 10^9/mL).
• 由CHO-HV-C1衍生的rAAV在体外转导,感染性和生物分布与TTT产生的载体相比较.
• 工程 CHO-HV-C1 细胞产生了rHSV-1 载体,尽管标位低于 V27 细胞.

结论:

• 开发的CHO/HSV系统为rAAV制造提供了一个新,可扩展和成本效益的无血清平台.
• 这种系统降低了制造成本,并减轻了与传统方法相关的偶然剂的风险.
• 为了提高载体产量,需要在工程 CHO 细胞中进一步优化 HSV-1 生产.