如何有效地维护pET表达等离子体的技巧
Diana Khananisho1, Alister J Cumming1, Daria Kulakova1
1Department of Biochemistry and Biophysics, Stockholm University, Stockholm, Sweden.
Current genetics
|November 8, 2023
概括
通过选择正确的Escherichia coli宿主菌株和抗生素耐药性磁带,有效地维持用于重组蛋白质生产的PET等离子体. 优化诱导时间以防止等离子体损失,特别是高T7RNA聚合酶菌株.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 微生物学 微生物学
背景情况:
- pET表达等离子体对于大肠杆菌的重组蛋白质生产至关重要.
- 血维护依赖于抗生素耐药性标记物,通常是β-乳糖酶 (Tn3.1) 或氨基糖类转化酶 (Tn903.1).
研究的目的:
- 用Tn3.1和Tn903.1遗传片段研究pET等离子体维护的效率.
- 为了确定影响长期重组蛋白表达过程中等离子体稳定性的因素.
主要方法:
- 在不同的大肠杆菌菌株 (例如,C41(DE3),BL21(DE3) 中对pET等离子体维持的比较分析.
- 评估不同诱导时间 (短时间与长时间) 和抗生素选择压力下的等离子体稳定性.
- 对Tn3.1和Tn903.1磁带性能进行评估.
主要成果:
- 在短的诱导时间下,pET等离子体在两个电阻标记器下有效地维持.
- 较长的诱导时间 (20小时) 显示了压力依赖的等离子体维护.
- 等离子体的稳定性受宿主菌株和使用的特定抗生素耐药性磁带的影响.
结论:
- 菌株选择 (例如,低T7RNA聚合酶的C41~DE3) 确保在长时间的诱导期内有效地维持等离子体.
- 对于高T7RNA聚合酶菌株 (例如,BL21(DE3),建议使用短诱导或Tn903.1录音带与kanamycin选择,以保持稳定的pET等离子体.
