定制工作流程,用于自信地识别含硫胺的酸盐,并将其与酸盐酸盐区分开来
Leonard A Daly1,2, Dominic P Byrne2, Simon Perkins3
1Centre for Proteome Research, Institute of Systems, Molecular & Integrative Biology, University of Liverpool, Crown Street, Liverpool L69 7ZB, U.K.
Journal of proteome research
|November 8, 2023
概括
我们开发了一种质谱法来识别蛋白质氨酸硫化 (sY),这是一个关键的翻译后修改. 这种新的"硫学"工作流确定了21种新的含硫氨酸的蛋白质,扩大了我们对sY的理解.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学
- 后翻译修改 后翻译修改
背景情况:
- 蛋白氨酸硫化 (sY) 是一种翻译后修饰 (PTM),对其生物作用的信息有限.
- 目前对人类sY的了解仅限于大约50种蛋白质,只有少数经过验证的硫化位点.
- 基于质谱 (MS) 的蛋白质组学是PTM分析的理想选择,但难以区分sY和酸 (pY).
研究的目的:
- 开发一种基于MS的工作流程,以系统地描述人类"硫".
- 为了更好地区分含有sY和pY的,进行准确的PTM分析.
- 识别新型含硫氨酸的蛋白质,了解它们的生物学意义.
主要方法:
- 优化Zr4+固定金属离子亲和力染色学 (IMAC) 和TiO2丰富策略用于sY丰富.
- 利用各种碎片化模式 (CID,HCD,EThcD,ETciD,UVPD) 进行sY和pY的广泛表征.
- 开发了一种使用低碰撞能量诱导的中性损失来区分硫酸盐和酸的策略.
主要成果:
- 根据特有的中性损失模式,成功地将sY-与异性pY-区分开来.
- 将"硫学"工作流应用于HEK-293细胞细胞外分泌体,识别了21种新的含硫胺的蛋白质.
- 通过酶学验证了几种新发现的硫蛋白质,并揭示了蛋白质和糖硫化酶之间的新型相互作用.
结论:
- 开发的基于MS的工作流允许对sY-的可靠识别和表征.
- 这项研究显著扩展了已知的人类硫蛋白质组,并强调了sY在生物调节中的重要性.
- 研究结果表明,蛋白质和甘氨酸硫化通路之间存在复杂的相互作用,为研究开辟了新的途径.
