基于重组酶聚合酶放大和实时PCR的Mucorales的快速检测
Rui Xu1,2, Dingchen Li1, Jingya Zhao1
1Department for Disinfection and Infection Control, Chinese PLA Center for Disease Control and Prevention, Beijing, China.
Frontiers in microbiology
|November 13, 2023
概括
新的重组酶聚合酶放大 (RPA) 和定量实时聚合酶连锁反应 (qPCR) 试验可以准确检测粘菌菌病. 这些新的方法针对线粒体的rnl基因,以改善这种侵入性真菌感染的诊断.
科学领域:
- 医学真菌学 医学真菌学
- 分子诊断学 分子诊断
- 传染性疾病 传染性疾病
背景情况:
- 粘菌菌是一种严重的侵入性真菌感染,死亡率高,特别是在免疫受损的个体中.
- 准确和及时诊断Mucorales感染仍然是一个重大的临床挑战.
- 现有的诊断方法往往缺乏所需的灵敏度和特异性.
研究的目的:
- 开发新的,敏感的和特定的分子检测技术,用于Mucorales.
- 针对线粒体的rnl基因,以提高诊断准确度.
- 评估开发的重组酶聚合酶放大 (RPA) 和定量实时聚合酶连锁反应 (qPCR) 试验的性能.
主要方法:
- 开发针对Mucorales线粒体基因的新型RPA和qPCR试验.
- 使用非向菌株,人类和小鼠血液的基因组DNA进行特异性测试.
- 通过对各种Mucorales物种的基因组DNA进行序列稀释进行敏感性测试.
- 在模拟的临床样本 (血液和血清) 中评估检测极限 (LoD).
主要成果:
- 两种RPA和qPCR测定都显示出高特异性,对非向菌株或人/老鼠血液没有观察到假阳性结果.
- 测试成功检测到来自Mucorales序列的五个属中的13种物种的DNA.
- 对于RPA,检测极限 (LoD) 低至1ppg,而对于qPCR则在10 fg至1 pg之间变化,这取决于物种.
- 在模拟的临床样本中,RPA和qPCR可以分别检测到每200μL血液/血清中只有10个和10个殖民地形成单位 (CFU) 的虫.
结论:
- 开发的实时RPA和qPCR测定表现出优异的灵敏度和特异性,用于诊断粘性肌病.
- 这些新型分子分析为快速准确识别Mucorales感染提供了有希望的工具.
- 这些发现支持这些试验在改善粘膜菌病患者治疗结果方面的临床实用性.
