在体外和体内对低亲和度遗传Ca2+指标的校准
Alba Delrio-Lorenzo1, Jonathan Rojo-Ruiz1, Patricia Torres-Vidal1
1Unidad de Excelencia, Instituto de Biomedicina y Genética Molecular de Valladolid (IBGM), Universidad de Valladolid y Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC), c/ Sanz y Forés 3, Valladolid 47003, Spain.
Cell calcium
|November 13, 2023
概括
准确测量细胞器官中的 (Ca2+) 对于了解细胞功能和疾病至关重要. 这项研究引入了一种用于校准基因编码指标的新方法,使得能够精确地在体内测量光线Ca2+度.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物化学 生物化学
- 身体生理学 身体生理学
背景情况:
- 离子 (Ca2+) 是重要的细胞内信使,调节许多细胞功能.
- 维持适当的细胞内Ca2+稳态是必不可少的,因为干扰会导致各种疾病.
- 精确测量有机体内的Ca2+具有挑战性,特别是在体内.
研究的目的:
- 开发和验证一种用于校准基因编码的Ca2+指标 (GECI) 的程序,用于光线Ca2+测量.
- 为了使用GECI准确量化内-质网膜 (ER/SR) 中的Ca2+度.
- 为各种组织和条件下GECI的体内校准提供可靠的方法.
主要方法:
- 使用了GAP (GFP-Aequorin Protein),这是一个针对ER/SR的GECI.
- 开发了一个校准协议,包括将样品加热到50-52°C以确定最小光信号 (Rmin).
- 应用了一个简单的算法,使用动态范围 (Rmax/Rmin) 和Ca2+亲和度 (KD) 来计算光线Ca2+度.
主要成果:
- 成功地将GAP的比度信号校准成准确的[Ca2+]ER/SR.
- 在多种细胞类型 (HeLa,HEK 293T,小鼠星球细胞) 中验证了体外程序.
- 在体内使用Drosophila证明了该方法的适用性.
结论:
- 开发的基于加热的方法为校准灯光GECI信号提供了强大的和广泛适用的方法.
- 这种方法可以在体内准确确定器官Ca2+水平,从而促进细胞信号传导和疾病的研究.
- 该程序与各种低Ca2+亲和力绿色和红色GECI兼容.
