设计一种有效的小表达标签,以增强基于大肠杆菌的无细胞和全细胞表达系统中的GPCR产生
Seongyeon Cho1, Haein Lee1, Yong Hee Han2
1School of Chemical and Biological Engineering, Institute of Chemical Process, Seoul National University, Seoul, Republic of Korea.
Protein science : a publication of the Protein Society
|November 15, 2023
概括
研究人员开发了AT10标签,以促进大肠杆菌中G蛋白结合受体 (GPCR) 的产生. 这种融合标签增强了用于制药和工业应用的表达.
科学领域:
- 生物化学和分子生物学
- 生物技术是生物技术.
- 药理学 药理学是指药理学的学科.
背景情况:
- G蛋白结合受体 (GPCRs) 在免疫和癌症转移等生物过程中至关重要.
- GPCRs是药物开发和生物传感技术的关键目标.
- 在大肠杆菌 (E. coli) 中GPCR的低表达产量阻碍了它们的大规模生产.
研究的目的:
- 开发一种用于增强大肠杆菌GPCR表达的新策略.
- 研究AT10标签在提高GPCR生产产量的有效性.
- 通过改进表达系统,促进GPCR的工业应用.
主要方法:
- 设计了一种AT10融合标签,具有A/T丰富的基因序列,以优化翻译启动.
- 将AT10标签与各种GPCRs的N端融合在一起,以便在大肠杆菌中表达.
- 采用效应蛋白来缓解表达期间的膜蛋白细胞毒性.
- 使用无细胞蛋白合成 (CFPS) 和全细胞大肠杆菌系统用于GPCR生产.
主要成果:
- AT10标签显著增加了E. coli中各种GPCRs的表达水平.
- 融合标签在大肠杆菌全细胞和无细胞蛋白质合成系统中都有效.
- 联合使用AT10标签和效应蛋白进一步提高了GPCR生产效率.
结论:
- AT10标签是促进大肠杆菌GPCR表达的高效工具.
- 这种方法为经济高效的大规模生产功能GPCR提供了一个有前途的途径.
- 提高GPCR的可用性可以加速制药开发和工业传感应用的进步.
