一种多重化时间分辨率光共振能量传输超高通量选试验,用于准SMAD4-SMAD3-DNA复合体
Wukun Ouyang1, Qianjin Li1, Qiankun Niu1
1Department of Pharmacology and Chemical Biology, Emory University School of Medicine, Atlanta, GA 30322, USA.
Journal of molecular cell biology
|November 15, 2023
概括
研究人员开发了一种新型检测方法,用于选针对SMAD4蛋白的药物,这是转化生长因子-β (TGFβ) 途径的关键调节者. 这种新方法确定了癌症免疫治疗的潜在小分子抑制剂.
科学领域:
- 在瘤学瘤学.
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 转化生长因子-β (TGFβ) 信号通路对于创建免疫抑制瘤微环境至关重要,使其成为癌症免疫疗法的关键目标.
- 目前针对TGFβ途径上游组件的治疗策略面临临临床翻译挑战.
- 开发SMAD4的抑制剂,TGFβ信号的下游调节器,是一个有希望的替代治疗方法.
研究的目的:
- 为选针对SMAD4蛋白的小分子抑制剂开发一种可靠的测试方法.
- 确定可以调节SMAD4-SMAD3-DNA复合体进行抗TGFβ信号传递的新型化合物.
主要方法:
- 开发基于细胞溶解酸的多重化时间解析光共振能量转移 (TR-FRET) 试验.
- 在超高通量选 (uHTS) 1536-well板格式中执行测试.
- 同时监测SMAD4-SMAD3蛋白-蛋白和SMADs-DNA蛋白-DNA相互作用.
主要成果:
- 多重TR-FRET试验显示了SMAD4-SMAD3-DNA复合体的高灵敏度和动态分析能力.
- 该试验证明在检测小分子抑制剂时具有可靠性,采用HHTS格式.
- 在FDA批准的化合物库的试点选中,gambogic acid和gambogenic acid被确定为潜在的打击化合物.
结论:
- 开发的多重复合TR-FRET试验是对新型抗TGFβ信号剂的大规模查的一个有价值的平台.
- 用小分子准SMAD4-SMAD3-DNA复合体为癌症免疫治疗提供了一个有希望的策略.
- 已识别的热门化合物需要进一步调查,作为潜在的治疗剂.
