[对纳米体对淋巴细胞激活基因-3 (LAG-3) 的查和活性分析]

科学领域:

• 免疫技术是一种免疫技术.
• 生物化学 生物化学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 淋巴细胞激活基因3 (LAG-3) 是一个免疫检查点受体,在T细胞调节中至关重要.
• 对LAG-3的失调有助于各种与免疫相关的疾病,使其成为治疗点.
• 开发针对LAG-3相互作用的特定抑制剂对于免疫疗法至关重要.

研究的目的:

• 要构建一个菌体显示纳米体图书馆免疫人类LAG-3.
• 选和表征抗LAG-3纳米体,以确定它们的结合亲和力和功能活性.
• 验证这些纳米体作为针对LAG-3途径的治疗剂的潜力.

主要方法:

• 用人类LAG-3蛋白对拉玛进行免疫接种,以产生外周血液cDNA.
• 一个纳米体菌体显示库的构建和质量分析.
• 使用菌体显示和下一代测序对抗LAG-3纳米体的查.
• 纳米体的表达,净化和表征通过ELISA,西斑和SPR.
• 对LAG-3和FGL-1相互作用的抑制作用的评估.

主要成果:

• 建立了一个高多样性的纳米体菌体免疫库,容量为7.20×108 CFU/mL.
• 三种不同的抗LAG-3纳米体 (VHH-L1-3,VHH-L3-2,VHH-L13-2) 被确定具有高纯度 (>95%).
• 纳米体表现出对人类LAG-3的特定高结合亲和力,其中VHH-L13-2的K_D为3.971×10-9 mol/L.
• VHH-L13-2有效地抑制了LAG-3和FGL-1的相互作用,其IC₅₀为15.58nmol/L.

结论:

• 一个抗LAG-3菌体显示纳米体库的成功生成.
• 已识别的纳米体具有高特异性和对LAG-3的结合亲和力.
• 这些纳米体有效地抑制了LAG-3及其联体FGL-1之间的相互作用,表明了治疗潜力.