从DNA编码的库中选和评估被击中化合物,该库来自基于固定内甲蛋白受体A的自然产品

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.
• 生物有机化学 生物有机化学

背景情况:

• 针对内甲素受体A (ET_A) 向药物的需求日益增加,需要先进的连接体查和评估策略.
• 开发用于固定ET_A的高效方法对于高通量选和连接体相互作用的热力学分析至关重要.

研究的目的:

• 开发一种使用生物直角化学的ET_A的新型一步固定化技术.
• 构建一个热力学模型来评估ET_A连接体和选潜在的候选药物.
• 为了研究一种新发现的化合物的药理活性和作用机制,NP845.5.

主要方法:

• 通过表皮生长因子受体标签 (EGFR标签) 和ibrutinib之间的生物对等化学反应,通过ET_A的一步固定.
• 使用西斑分析对形态,抗体/连接体识别和特异性的固定ET_A的全面表征.
• 构建一个热力学模型来评估对ET_A的联体结合,以macitentan,ambrisentan和bosentan为例.
• 对DNA编码库进行选以识别NP845并计算其关联常数和热力学参数 (ΔS^θ, ΔH^θ, ΔG^θ).
• 在体外细胞试验中评估NP845对血管光滑肌细胞 (VSMC) 信号通路的影响.

主要成果:

• 成功的一步固定ET_A的确认形态,识别活动和特异性.
• 开发一种热力学模型,使得能够评估特定的ET_A连接体.
• 来自DNA编码库的NP845的识别和表征,在37°C时表现出 (2.24 ± 0.15) × 10⁵ M^{-1 的关联常数.}
• 热力学分析显示,静电力是NP845-ET_A相互作用的主要驱动力.
• 在试验室中,NP845通过降低VSMC中的PKA,B-Raf,MEK和ERK1表达来证明NP845的疗效.

结论:

• 开发的ET_A固定化策略为带查和评估提供了一个有效的平台.
• NP845被确定为一种有前途的化合物,对ET_A介导的疾病具有显著的药理活性.
• 这项研究阐明了NP845与ET_A的结合机制,突出了静电相互作用.
• NP845显示了在ET_A信号驱动的疾病中的治疗应用的潜力.