净化小鼠胚胎纤维细胞 (MEFs)
1ACRF Department of Cancer Biology and Therapeutics and Division of Genome Sciences and Cancer, John Curtin School of Medical Research, Australian National University, Acton, Canberra, Australia.
Current protocols
|November 21, 2023
概括
小鼠胚胎纤维细胞 (MEFs) 是生物测定和料层中必不可少的初级细胞. 优化它们的隔离,培养和冷保存确保了研究应用的高可行性和扩散潜力.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 小鼠胚胎纤维细胞 (MEFs) 是从小鼠胚胎中获得的初级细胞.
- 它们被广泛用于料层和各种生物分析.
- 多重外形料为研究提供未经转化细胞的来源.
研究的目的:
- 详细介绍MEFs的净化,通过,膨胀和冷保存.
- 突出MEF可行性和扩散的最大化关键参数.
- 为一致的MEF准备提供标准化的协议.
主要方法:
- 摘取胚胎,去除非介质细胞组织,以及机械碎.
- 使用素-EDTA/DNase进行酶性消化,以优化度和持续时间.
- 扩张的细胞培养,使用冷保护剂的冷保存,以及解协议.
主要成果:
- 建立了MEF隔离和扩展到通道5的协议.
- 确定了成功冷保存和解的关键因素,包括温度控制和细胞密度.
- 证明了试剂质量和程序标准化对于MEF一致性的重要性.
结论:
- 标准化的协议对于生成高质量的MEF至关重要.
- 优化解离,培养和冷保存可以提高细胞活力和增殖.
- 正在不断完善MEF制备技术,以最大限度地减少变化.
