一个快速而敏感的,多重的,全山RNA光 in situ杂交和免疫组织化学协议

科学领域:

• 植物生物学 植物生物学
• 分子生物学分子生物学
• 基因组学就是基因组学.

背景情况:

• 单细胞转录组学已经升,但在植物中的体内验证因缺乏可靠的方法而受到限制.
• 植物发育建模受到空间基因表达数据不足的阻碍.
• 在组织环境中对基因表达分析至关重要,但对于植物而言,可靠的整体安装协议很少.

研究的目的:

• 为植物建立一个高效和可靠的全山RNA光 in situ杂交 (FISH) 协议.
• 为了在整个植物组织中进行详细的3D空间基因表达分析.
• 为了促进单细胞转录组学数据的验证,并改进植物发育建模.

主要方法:

• 对植物进行为期3天的全山RNA-FISH协议的调整.
• 利用杂交连锁反应 (HCR) 进行无抗体信号放大.
• 结合HCR RNA-FISH与内源光蛋白检测和改善免疫组织化学 (IHC).

主要成果:

• 在Arabidopsis的花朵和单根中成功展示了HCR RNA-FISH的全山,背景低和预期的空间信号.
• 在3D中同时检测到三个成绩单.
• 验证了HCR RNA-FISH与光蛋白检测和IHC的兼容性.

结论:

• 开发的全山 HCR RNA-FISH 方法为研究整个植物组织中的3D空间基因表达模式提供了可访问的工具.
• 该协议解决了对转录基因数据的强有力的验证的需求,并加强了植物的空间基因表达研究.
• 组合的HCR RNA-FISH和IHC方法为植物发育中的基因表达的综合分析提供了一个强大的方法.