一种在线二维方法,用2D-CEX-AEX-MS工作流来描述重组单克隆抗体的基于电荷的异质性

科学领域:

• 生物制药学分析
• 分析化学 分析化学
• 蛋白质化学 蛋白质化学

背景情况:

• 评估单克隆抗体 (mAb) 电荷异质性对于产品的释放至关重要.
• 传统的方法,如阴离子交换染色学 (CEX) 将mAbs分为酸性,主要和基本的变体.
• 在用单一的分析技术解决所有电荷变体时存在局限性.

研究的目的:

• 开发和验证在线二维液态色谱 (2D-LC) 方法与质谱学 (MS) 结合,用于全面的mAb电荷异质性表征.
• 为了证明2D-LC与独立的CEX和离子交换染色学 (AEX) 方法相比,具有更高的分辨率.
• 为了确定有助于收费变体的特定翻译后修改.

主要方法:

• 实现含有挥发性盐的2D-LC系统,其中CEX在第一个维度 (D1) 和AEX在第二个维度 (D2).
• 使用2D心切方法将主要的CEX峰转移到AEX-MS系统进行详细分析.
• 用原生质谱 (MS) 来识别变种.

主要成果:

• 与单个CEX或AEX方法相比,2D-LC方法成功地解决了多个mAbs (mAb A:13,mAb B:9,mAb C:11) 的更多充电变量.
• 确定了特定的电荷变体,如Asp残留物的化,氧化和异构化.
• 证明这些微小的变化不能通过独立的分析方法得到解决.

结论:

• 开发的2D-LC-MS方法为表征mAb电荷异质性提供了增强的分辨率.
• 这种先进的分析方法对于检测电荷分布和形状的微妙变化至关重要.
• 改进了mAb变种的表征,有助于更强大的质量控制和产品发布.