来自蚊子细胞系的传染性沃尔巴基亚的制备

科学领域:

• 微生物学和分子生物学
• 昆虫的共生体 昆虫的共生体
• 基因工程是一种基因工程.

背景情况:

• 沃尔巴基亚的基因工程需要恢复,维护和重新感染这些有义务的细胞内细菌的方法.
• 沃尔巴基亚的细胞内生活方式为操纵带来了独特的挑战,需要标准细菌学技术的适应.

研究的目的:

• 开发和描述用于最大限度地从宿主细胞中恢复和放大传染性Wolbachia (wStri) 的协议.
• 为了确定能够增强沃尔巴基亚复制的条件,并为随后的基因操纵和繁殖提供产量.

主要方法:

• 利用Aedes albopictus C7-10细胞系作为wStri菌株的接收者.
• 从持久感染的C/wStri1细胞中制备的感染性Wolbachia注射剂.
• 在先天C7-10细胞中放大了Wolbachia,先用Mitomycin C预处理以抑制宿主细胞复制.

主要成果:

• 已经证明,用mitomycin C对受体细胞进行预处理可以改善Wolbachia的恢复,特别是从低水平的注射剂中恢复.
• 确定了20-基松诱导的细胞循环停止等条件会影响wStri的恢复.
• 为系统地探索有利于细菌复制和产量的条件,建立了wStri免疫源.

结论:

• 描述的协议促进了传染性沃尔巴基亚的制备和放大,这对于推进基因工程工作至关重要.
• 优化条件,包括宿主细胞预处理,提高Wolbachia操纵和繁殖的效率.
• 这项工作为在感染细胞中对Wolbachia进行系统的小规模操纵提供了基础.