将TfR1抗体的体外亲和度测量与TfR1抗体的体外亲和度测量进行比较:表面等离子体共振与细胞亲和度对比
Gillian Bonvicini1, Sunitha Bagawath Singh2, Patrik Nygren2
1BioArctic AB, Warfvinges väg 35, SE-112 51, Stockholm, Sweden; Department of Public Health and Caring Sciences/Geriatrics, Uppsala University, Rudbeck Laboratory, Dag Hammarskjölds väg 20, SE-751 85, Uppsala, Sweden.
Analytical biochemistry
|November 25, 2023
概括
测量转移素受体1 (TfR1) 抗体亲和力需要仔细的测试选择. 进行比较的方法显示,Biacore测试中的N端FLAG标签TfR1捕获最能反映体内抗体结合.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 生物技术是生物技术.
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 转移林受体1 (TfR1) 是通过血脑屏障传递大生物分子的关键标.
- 测量抗TfR1抗体的结合亲和力的最佳方法尚不清楚.
- 已确定的抗体 (15G11,OX26,8D3) 在体内成功地跨物种传播.
研究的目的:
- 为了比较不同的方法来测量抗TfR1抗体的结合亲和力.
- 为了确定评估TfR1抗体结合动力学的最可靠的测试设置.
主要方法:
- 使用Biacore的表面等离子体共振 (SPR) 具有不同的测试方向 (抗体捕获与连接体固定).
- 在细胞结合测试.细胞结合测试.
- 对抗体15G11,OX26和8D3与它们各自的物种相比的亲缘关系的比较" TfR1.1.
主要成果:
- 根据测试方向 (抗体与作为分析物的TfR1) 的基础上,SPR解离率有显著的变化.
- 将N端FLAG标签TfR1作为Biacore中的配体固定,产生了明显的亲缘关系,与细胞检测最一致.
- 基于细胞的测定和FLAG-tag TfR1 Biacore设置提供了最可翻译的亲和度测量.
结论:
- 测试参数,如方向,表面捕获方法和抗体格式,对TfR1抗体的结合动力学测量具有关键影响.
- 在SPR中采用N端FLAG标签TfR1捕获方法,与细胞检测一起,提供了最能预测体内表现的明显亲缘关系.
- 标准化这些测定条件对于可靠地比较针对TfR1的生物制剂至关重要.
