在重组血红蛋白材料中对宿主细胞蛋白质杂质的无标签量化

科学领域:

• 生物化学和蛋白质组学
• 分析化学 分析化学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 准确的定量分析需要具有已知的杂质质量分数的纯初级校准器.
• 宿主细胞蛋白 (HCP) 是生物工程蛋白质中的关键杂质,用于校准标准.
• 无标签量化 (LFQ) 被探索为HPC杂质确定的一种方法.

研究的目的:

• 评估无标签量化 (LFQ) 用于确定生物工程蛋白质标准中的宿主细胞蛋白质 (HCP) 质量分数.
• 评估LFQ用于蛋白质校准的可靠性和可访问性.
• 为了证明LFQ在不同蛋白质组中的普遍适用性.

主要方法:

• 使用来自大肠杆菌的纯化血红蛋白-A2 (HbA2),包括天然和标有U15N的形式.
• 通过将大肠杆菌蛋白的MS1强度与HbA2.2相对结合,LFQ量化了HCP杂质.
• 校准是使用E. coli溶解酸加上已知的纯HbA2质量比进行的;酵母和人类K562蛋白质被用于验证.

主要成果:

• LFQ确定HbA2质量分数为923和928 mg/g,扩展不确定性分别为2.8%和1.3%.
• 在HbA2量化中的总体不确定性中,LFQ贡献了大约3% .
• 在校准器混合物中至少有五种蛋白质足以保持采样误差低于15%.

结论:

• LFQ是一种可行的和可访问的方法,用于在蛋白质校准器中分配HCP杂质的质量分数.
• 该方法证明了在不同蛋白质组和减少样本复杂性的普遍适用性.
• 使用LFQ与原始材料是实用的,当5%的总体不确定性是可以接受的,避免广泛的净化.