用PTCR和内部碎片在中向下MS工作流中实施的trastuzumab deruxtecan的改进特征
Corentin Beaumal1,2, Evolène Deslignière1,2, Hélène Diemer1,2
1Laboratoire de Spectrométrie de Masse Bio Organique, IPHC UMR 7178, CNRS, Université de Strasbourg, 67087, Strasbourg, France.
Analytical and bioanalytical chemistry
|November 26, 2023
概括
新的软件和质子转移电荷降低 (PTCR) 增强了抗体-药物联合体 (ADC) 的表征. 这种方法改善了序列覆盖率,并确定了复杂生物治疗药物的结合部位.
科学领域:
- 生物化学和分析化学的研究.
- 质谱测量质量谱测量
- 生物制药学分析
背景情况:
- 抗体-药物结合物 (ADC) 由于固有的蛋白质微变性和生物结合异质性,存在重大分析挑战.
- 现有的上下 (TD) 和中下 (MD) 质谱策略用于ADC表征,产生拥挤的光谱与重叠的碎片离子.
研究的目的:
- 开发和应用先进的质谱技术,以全面表征抗体-药物联合体 (ADCs).
- 为了提高序列覆盖率,并阐明ADCs如trastuzumab deruxtecan (T-DXd) 中的有效载荷结合部位.
主要方法:
- 使用专用软件 (ClipsMS) 进行内部碎片离子搜索,以扩大碎片离子搜索空间.
- 应用了质子转移电荷减小 (PTCR) 来改善质谱中重叠的碎片离子的分离.
- 与这些ADC分析方法相结合,采用了子单位碎片化策略.
主要成果:
- 小单元碎片化实现了7090%的序列覆盖率,增加到内部碎片分配的完整序列覆盖率.
- 质子转移电荷减小 (PTCR) 适度增加了213%的序列覆盖率,并减少了光谱复杂性.
- PTCR在结合位点增强了特征碎片离子的1.5至2.5倍,有助于位点阐明.
结论:
- 内部碎片离子搜索和PTCR反应对于增强序列覆盖率和在ADC中识别结合位很有价值.
- 综合方法为全面的ADC表征提供了一个强大的策略,适合研发实验室.
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