单层石墨烯应用于冷电子显微镜网格,用于高分辨率的结构确定
Andrew V Grassetti1, Mira B May1, Joseph H Davis2
1Department of Biology, Massachusetts Institute of Technology.
Journal of visualized experiments : JoVE
|November 27, 2023
概括
石墨烯网格通过增强颗粒密度和减少空气-水接口问题来改善冷电子显微镜 (cryoEM) 样品制备. 这种方法促进了高分辨率的结构确定,以2.7 Å Cas9 复杂图为例.
科学领域:
- 结构生物学是结构生物学.
- 生物物理学的生物物理.
- 材料科学是一种材料科学.
背景情况:
- 低温电子显微镜 (cryoEM) 对于确定宏分子近原子分辨率结构至关重要.
- 样品准备是冷EM的一个重要瓶,通常是由于样品在玻璃体冰中的表现不佳而受到限制.
- 低温EM网上的石墨烯涂层为改善样品呈现提供了一个有前途的解决方案.
研究的目的:
- 为将石墨烯应用于冷EM电网提供详细的协议.
- 建立评估电网水友性和确认石墨烯存在的方法.
- 为了证明石墨烯支在冷EM工作流程中的有效性.
主要方法:
- 连续石墨烯层在冷EM网格上的应用.
- 快速评估电网的水友性.
- 基于电子显微镜 (EM) 通过衍射模式确认石墨烯.
- 克里奥EM数据收集和图像处理.
主要成果:
- 涂上石墨烯的网格通常会增加颗粒密度,并减少空气-水接口相互作用.
- 成功开发了石墨烯应用和评估的协议.
- 一个Cas9复合体的2.7 Å分辨率密度图用低度样本的石墨烯支器快速重建.
结论:
- 涂上石墨烯的冷EM网格代表了样品制备的重大进步.
- 这些改进的网格有助于更高的颗粒密度和更好的样本行为.
- 该方法使高效的高分辨率结构确定成为可能,即使对于具有挑战性的样品.
