自传递,化学修饰的CRISPRRNA用于AAV联合传递和体内基因组编辑

科学领域:

• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.
• 遗传学 遗传学 是一个

背景情况:

• 在CRISPR-Cas9基因组编辑中,可编程性依赖于导向RNA (gRNA).
• 对于CRISPR-Cas9应用来说,gRNAs的传递存在挑战.
• 核酸的化学修饰提高了稳定性,细胞吸收和安全性,类似于寡核酸治疗药物.

研究的目的:

• 为了提高化学修饰导向RNAs (crRNAs) 的稳定性和功效.
• 通过使用新的策略,改善crRNAs的体内传递和生物分布.
• 建立一个概念验证,用于在体内基因组编辑的crRNAs与腺相关病毒 (AAV) 载体的联合交付.

主要方法:

• 工程重度和完全修改的SpyCas9crRNA和转激活crRNA (tracrRNA) 以提高稳定性.
• 开发出一个短,稳定的"保护性"来增强crRNA的稳定性和功效.
• 利用保护性寡质的生物结合来改善crRNA细胞吸收和体内生物分布.
• 在成年小鼠中,与保护性寡基和表达tracrRNA和Cas9或基编辑器的AAV载体共递的未配制的,化学修饰的crRNAs.

主要成果:

• 一种"保护性橄"显著增强了严重修饰的crRNAs的效能和稳定性.
• 保护寡头使生物结合成为可能,改善了crRNA的细胞吸收和体内生物分布.
• 在成年老鼠肝脏和中枢神经系统中通过AAV/crRNA联合传递成功实现了体内基因组编辑.

结论:

• 具有保护性寡基的化学修饰crRNAs代表了增强CRISPR-Cas9传递和疗效的有希望的策略.
• AAV/crRNA联合传递可实现暂时编辑,目标复杂化,指导重新剂量和载体不活化.
• 这种方法为体内基因组编辑应用提供了一个多功能平台.