基于阿加板的活性试验,用于轻松快速选表达非特异性过氧酶的复合Pichia pastoris
Fabian Schmitz1, Annika Röder1, Maike Hoffrogge1
1Institute of Biochemistry, Heinrich Heine University Düsseldorf, Universitätsstraße 1, Düsseldorf, Germany.
Biotechnology journal
|December 4, 2023
概括
我们开发了一种快速的,两步的阿加板测试,用于选Pichia pastoris中的非特异性过氧酶 (UPOs). 这种方法有效地识别出高产变压剂,加速生物催化剂的开发.
科学领域:
- 生物催化剂是一种生物催化剂.
- 蛋白质工程是指蛋白质工程.
- 微生物生物技术 微生物生物技术
背景情况:
- 非特异性过氧酶 (UPO) 是氧功能化的有价值的生物催化剂,但它们的高效生产需要优化宿主系统.
- 皮奇亚牧羊 (Komagataella phaffii) 是UPO表达的常见宿主,但由于基因拷贝数量变化,实现高产量具有挑战性.
- 目前用于高产P. pastoris变形体的选方法耗时且劳动密集.
研究的目的:
- 开发一种简化,快速和具有成本效益的基于阿加板的测定方法,用于选表达非特异性过氧酶 (UPO) 的Pichia pastoris变异体.
- 为了能够更快地识别高活性UPO产生的微生物菌株,而不需要专门的设备.
主要方法:
- 设计了一种两步的阿加板测定,涉及ABTS的甲醇含板的初始生长和表达.
- 添加了含有ABTS和过氧化物的顶部亚格层,以可视化UPO活动.
- 该试验使用两种UPO (AbrUPO和PaDa-I) 进行了验证,并通过液相查证实了结果.
主要成果:
- 开发的阿加板测试允许在15分钟内通过不同的绿色区域可视化UPO活动.
- 该试验成功地确定了活性UPO分泌的P. pastoris变形体.
- 阿加板测定结果与定量液相选有很好的相关性.
结论:
- 这种新的两步阿加板测定方法提供了一种高效,快速和用户友好的方法来选生产UPO的P. pastoris.
- 与传统的基于液体的方法相比,这种测试显著减少了选时间和精力.
- 该方法促进了工业应用生物催化剂的加速开发和优化.
