一种CRISPR-Cas9介导的多功能方法,用于光蛋白基因的有针对性集成,以可视化Xenopus laevis中的内源基因表达
Makoto Mochii1, Kai Akizuki1, Hero Ossaka1
1Department of Life Science, Graduate School of Science, University of Hyogo, Akougun, Hyogo, 678-1297, Japan.
Developmental biology
|December 5, 2023
概括
我们开发了一种简单的CRISPR-Cas9方法,将光记者基因插入Xenopus laevis中,使其能够在发育研究中进行组织特异性表达.
科学领域:
- 发展生物学 发展生物学
- 再生医学是一种再生医学.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 鱼 (Xenopus laevis) 是研究发育和再生的关键模型生物.
- 现有的Xenopus目标集成方法存在局限性,特别是使用内源性监管元素创建报告员线.
- 需要改进的技术来产生精确的基因表达记者.
研究的目的:
- 开发和验证一种基于CRISPR-Cas9的简单方法,用于将光蛋白基因引入Xenopus laevis.目标基因的5'未翻译区域 (5'UTRs).
- 创建反映内源基因表达模式的记者线.
- 建立一个工具,用于增强基因功能和表达研究在Xenopus.
主要方法:
- 采用CRISPR-Cas9系统,使用单一指导RNA (sgRNA) 和Cas9蛋白.
- 一种含有增强绿色光蛋白 (eGFP) 基因的供体等离子体,与包括目标5'UTR在内的不同长度的基因组片段 (66-878 bp) 相邻,被共同注入受精的Xenopus laevis蛋中.
- 目标基因包括krt12.2.L,myod1.S,sox2.L和brevican.S. 这三种基因.
主要成果:
- 已成功将eGFP基因集成到目标基因的5'UTR中.
- 胚胎表现出特定于组织的EGFP光,准确地回顾了目标基因的内源性表达模式.
- 整合效率从2.1%到13.2%不等,这取决于目标位点和捐赠者DNA片段的长度.
- 综合DNA的生殖系传播得到证实.
结论:
- 开发的CRISPR-Cas9方法提供了一种简单有效的方法,可以在Xenopus laevis.中产生光记者线.
- 这种技术允许精确监测基因表达,有助于研究发育过程和再生.
- 该方法为Xenopus laevis的功能基因组学研究提供了有价值的工具.
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